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 　　實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

　　3D矩陣中的單細(xì)胞

　　* HT-1080癌細(xì)胞在膠原基質(zhì)球體和類器官培養(yǎng)中遷移的3D活細(xì)胞成像

　　球體和類器官培養(yǎng)

　　* 在確定的微圖案上形成球體

　　* 當(dāng)在灌注下培養(yǎng)時(shí)，球體生長(zhǎng)率大大提高

　　* 長(zhǎng)期培養(yǎng)球體的活/死染色

　　* PDAC細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的類器官共培養(yǎng)

　　* HT-1080癌細(xì)胞在3D膠原凝膠中的侵襲

　　* 內(nèi)皮細(xì)胞在3D膠原凝膠中的發(fā)芽

　　* L929球體橫截面的共聚焦顯微鏡成像

　　3D中的趨化性和遷移分析

　　* 3D中I型膠原蛋白凝膠內(nèi)皮細(xì)胞向FCS梯度的趨化性

　　3D矩陣中的單細(xì)胞

　　HT-1080癌細(xì)胞在膠原基質(zhì)球體和類器官培養(yǎng)中遷移的3D活細(xì)胞成像

　　將表達(dá)LifeAct的HT-1080細(xì)胞(綠色)接種在1.5毫克/毫升I型膠原蛋白，大鼠尾層(白色)的µ-Slide Chemotaxis細(xì)胞趨化載玻片中。通過(guò)使用水浸物鏡40x/1.2在蔡司共焦顯微鏡LSM 880 AxioObserver上每300秒拍攝一張照片來(lái)記錄細(xì)胞遷移。

　　球體和類器官培養(yǎng)

　　在確定的微圖案上形成球體

　　微圖案是優(yōu)化3D分析的強(qiáng)大工具。ibidi的µ-Slides With Multi-Cell µ-Patterns載玻片能夠?yàn)楦鞣N2D和3D細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用實(shí)現(xiàn)空間定義的細(xì)胞粘附。被Bioinert生物惰性包圍的確定的粘附點(diǎn)能夠從細(xì)胞懸浮液中捕獲所有粘附的單細(xì)胞。生物惰性是完全不可附著細(xì)胞的。這迫使所有細(xì)胞在粘附點(diǎn)處相互聚集，從而以一種確定和可控的方式形成球體 從而以確定和可控的方式形成球體。

　　NIH-3T3細(xì)胞(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)的球體形成。將單個(gè)細(xì)胞接種于µ-Slide 8 Well With Multi-Cell µ-Pattern腔室載玻片中。明場(chǎng)顯微鏡，10x物鏡。

　　NIH-3T3細(xì)胞球狀體的形成，在將單細(xì)胞接種于µ-Slide VI 0.4 With Multi-Cell µ-Pattern通道載玻片中。相差顯微鏡，4x物鏡。

　　NIH-3T3細(xì)胞(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)在200μm粘附點(diǎn)上的球狀體形成，記錄球狀體生成64小時(shí)。相差活細(xì)胞成像，4x物鏡。

　　當(dāng)在灌注下培養(yǎng)時(shí)，球體生長(zhǎng)率大大提高

　　L929成纖維細(xì)胞在µ-Slide spheroid Perfusion，生物惰性(ibidi 80350)，第1-14天，接種濃度為5 × 10 5個(gè)單細(xì)胞/ml。左:不灌注，隔天換藥。右: ibidi Pump System 泵系統(tǒng)（流體剪切力系統(tǒng)）灌注，0.75 ml/min。相差顯微鏡，10 x物鏡，孔徑800µm。

　　長(zhǎng)期培養(yǎng)球體的活/死染色

　　使用 ibidi Pump System 泵系統(tǒng)（流體剪切力系統(tǒng)），灌注培養(yǎng)14天后，在µ-Slide spheroid Perfusion中對(duì)L929球體進(jìn)行活/死FDA/PI染色,0.75 ml/min。綠色:活細(xì)胞(二乙酸酸熒光素，F(xiàn)DA);紅色:死細(xì)胞(碘化丙啶，PI)。寬場(chǎng)熒光顯微鏡，10x物鏡。

　　PDAC細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的類器官共培養(yǎng)

　　人胰腺癌(PDAC)細(xì)胞系PA-TU-8988T(綠色，用CellTrackerTM綠色染色)和小鼠成纖維細(xì)胞系mPSC4(紅色，用CellTrackerTM橙色CMTMR染色)在µ-Slide Spheroid Perfusion中共培養(yǎng)的類器官。µ-Slide上覆蓋25µm FEP箔，以便在垂直光片顯微鏡中匹配更接近水的折射率。該圖像是由S. Volkery在慕尼黑工業(yè)大學(xué)用M Squared Aurora Airy光束垂直光片裝置拍攝的。樣品由德國(guó)馬爾堡大學(xué)的K. Roth提供。

　　HT-1080癌細(xì)胞在3D膠原凝膠中的侵襲

　　將侵襲性人纖維肉瘤癌球體(HT-1080)包埋于ⅰ型膠原蛋白，大鼠尾凝膠中。在µ-Slide 8 Well中記錄對(duì)凝膠基質(zhì)的侵入48小時(shí)。4倍物鏡，明場(chǎng)。

　　內(nèi)皮細(xì)胞在3D膠原凝膠中的發(fā)芽

　　人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)球體的活細(xì)胞成像，嵌入由I型膠原蛋白，大鼠尾制成的3D凝膠中。在µ-Slide 8孔中記錄凝膠基質(zhì)的發(fā)芽過(guò)程44小時(shí)，10倍和4倍物鏡，明場(chǎng)。

　　L929球體橫截面的共聚焦顯微鏡成像

　　在µ-Slide spheroid Perfusion中清除(紅色:phalloidin，青色:DAPI)后，染色的L929球體的橫截面共聚焦顯微鏡。球狀體的清除使得甚至在球狀體成纖維細(xì)胞的中心的細(xì)胞可見(jiàn)，同時(shí)保持球狀體的形態(tài)。 更多詳情請(qǐng)點(diǎn)擊查看“Protocol for Spheroid Culture, Staining, and Clearing for 3D Imaging”.數(shù)據(jù)由德國(guó)慕尼黑工業(yè)大學(xué)的Julian Hofmann和Selina J. Keppler提供。

　　3D中的趨化性和遷移分析

　　3D中I型膠原蛋白凝膠內(nèi)皮細(xì)胞向FCS梯度的趨化性

　　人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)包埋在1.5µg/ml I型膠原凝膠中的活細(xì)胞成像，在µ-Slide Chemotaxis細(xì)胞趨化載玻片中，向胎牛血清遷移。注意:在趨化過(guò)程中，細(xì)胞相互連接形成字符串。相差，4x物鏡，24小時(shí)。

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