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　　周密的實(shí)驗(yàn)設(shè)置方案，以及成像前對(duì)細(xì)胞的優(yōu)化、可重復(fù)的處理，是顯微鏡實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。為此，必須考慮幾個(gè)因素，這些因素取決于顯微鏡方法和所使用的一般設(shè)置：

　　• 容器幾何形狀

　　• 基材、表面和涂層

　　• 無(wú)菌和可繁殖細(xì)胞處理

　　• 活細(xì)胞和健康細(xì)胞

　　• 滿足顯微鏡的光學(xué)要求

　　• 可選：滿足活細(xì)胞成像要求

　　實(shí)驗(yàn)方案的關(guān)鍵問(wèn)題是什么？

　　如何為您的實(shí)驗(yàn)和顯微鏡技術(shù)選擇最佳幾何形狀的實(shí)驗(yàn)器皿？

　　存在多種細(xì)胞培養(yǎng)容器以滿足不同細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定的復(fù)雜性，例如使用懸浮或粘附細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)、2D或3D測(cè)定、單培養(yǎng)或共培養(yǎng)測(cè)定等等。主要培養(yǎng)容器的幾何形狀（如生長(zhǎng)面積和體積）是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和解釋的重要因素，在開(kāi)始之前應(yīng)仔細(xì)考慮。此外，容器幾何形狀影響實(shí)驗(yàn)中的物理（例如蒸發(fā)）和光學(xué)（例如彎液面效應(yīng)）特性。

　　ibidi的解決方案

　　ibidi提供各種幾何形狀的成像小室，專門(mén)為您的實(shí)驗(yàn)量身定制。了解

　　更多詳情請(qǐng)點(diǎn)擊查看“The Geometry of the ibidi Chambers”.

　　您為您的特定細(xì)胞類型和顯微鏡方法選擇了合適的基底、表面和涂層了嗎？

　　細(xì)胞的培養(yǎng)、生長(zhǎng)、發(fā)育和信號(hào)傳導(dǎo)強(qiáng)烈依賴于用于細(xì)胞培養(yǎng)的表面。此外，光學(xué)規(guī)格要求強(qiáng)烈決定了哪種基底是可取的。硼硅酸鹽玻璃被廣泛用作基底，然而，涂層可能是支持細(xì)胞粘附所必需的。聚合物的使用也非常普遍。它們通常經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理，使得細(xì)胞能直接粘附；然而，并非市場(chǎng)上所有可用的聚合物都適用于顯微鏡。ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底部的實(shí)驗(yàn)器皿為各種高分辨率顯微鏡應(yīng)用提供了最優(yōu)的光學(xué)性能。

　　然而，如果細(xì)胞表面需要特定的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），則可以使用涂層，例如膠原I、膠原IV或聚-L-賴氨酸。對(duì)于懸浮細(xì)胞或球體培養(yǎng)，則應(yīng)使用非粘附表面，如ibidi Bioinert生物惰性表面。

　　此外，還需要考慮是進(jìn)行2D還是3D實(shí)驗(yàn)。有關(guān)更多詳細(xì)信息，請(qǐng)點(diǎn)擊查看3D Cell Culture Assays。

　　ibidi的解決方案

　　ibidi Labware耗材

　　ibidi µ-Slides, µ-Dishes, and µ-Plates的突出特點(diǎn)是其超薄的蓋玻片底部，非常適合高端顯微鏡應(yīng)用。ibidi提供 ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的實(shí)驗(yàn)器皿；也提供具有各種表面和涂層的成像小室，例如用于直接培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的ibiTreat (tissue culture-treated) ibiTreat（組織培養(yǎng)處理的）表面。有關(guān)更多詳細(xì)信息，請(qǐng)點(diǎn)擊查看“Surfaces and Coatings”。

　　Non-Adherent Bioinert Surface非貼壁生物惰性表面

　　生物惰性是一種穩(wěn)定、生物惰性的表面，用于在沒(méi)有任何細(xì)胞或生物分子粘附的非粘附表面上對(duì)類器官、球體和懸浮細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡觀察。目前有 µ-Dish 35^{mm, high}Bioinert。

　　Micropatterning微圖案

　　ibidi µ-Patterning technology實(shí)現(xiàn)了各種2D和3D細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用的空間定義的細(xì)胞粘附。小型化的粘合劑圖案（例如，線、正方形或點(diǎn)）不可逆地印刷在ibidi Polymer Coverslip的非粘性生物惰性表面上，從而實(shí)現(xiàn)精確控制的細(xì)胞粘附。

　　有關(guān)ibidi µ-Patterning技術(shù)產(chǎn)品µ-Pattern Slides更多詳情細(xì)信息，請(qǐng)點(diǎn)擊查看“µ-Patterning technology”。

　　您能確保細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中以及整個(gè)成像過(guò)程中都是健康的嗎?

　　顯微鏡可以做活細(xì)胞和固定細(xì)胞，這取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)置和所需的讀數(shù)。在活細(xì)胞中，顯微鏡檢查過(guò)程會(huì)造成壓力。細(xì)胞必須從培養(yǎng)箱中取出，這導(dǎo)致周?chē)鷾囟群蜐穸鹊慕档?。此外，?xì)胞暴露在光下一段時(shí)間，這可能會(huì)導(dǎo)致光毒性。一般來(lái)說(shuō)，所有的顯微鏡步驟都應(yīng)該盡可能快地進(jìn)行，同時(shí)保持精度，以最大限度地減少細(xì)胞壓力。

　　因此，任何成像實(shí)驗(yàn)都只能使用有活力和健康的細(xì)胞。為了確保這一點(diǎn)，應(yīng)每天在顯微鏡下控制細(xì)胞附著、形態(tài)、融合、營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和污染跡象。此外，一些參數(shù)，如溫度和濕度，必須保持一致。

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)在µ-Slide 4孔中的免疫熒光

　　您能確保您選擇的顯微鏡技術(shù)的光學(xué)要求得到滿足嗎?

　　每種顯微鏡技術(shù)對(duì)底材和細(xì)胞預(yù)處理都有自己的特殊要求，在計(jì)劃實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)考慮這些要求。有關(guān)不同襯底的光學(xué)參數(shù)的更詳細(xì)信息更多詳情細(xì)信息，請(qǐng)點(diǎn)擊查看"Microscopy Parameters of Materials" and "Comparison of Material Specifications".

　　此外，在開(kāi)始顯微鏡檢查之前，有一些一般的建議:

　　·為了防止在容器內(nèi)形成氣泡，所有介質(zhì)都應(yīng)保持平衡。通通過(guò)最小化溫差，可以避免可能?chē)?yán)重干擾顯微鏡的外部對(duì)流。

　　·在進(jìn)行熒光顯微鏡檢查時(shí)，最大限度地減少激發(fā)光引起的細(xì)胞應(yīng)激尤為重要，因?yàn)檫@可能會(huì)改變實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

　　·此外，細(xì)胞培養(yǎng)血管或培養(yǎng)基的自發(fā)熒光可能是不想要的副作用。因此，熒光顯微鏡應(yīng)該應(yīng)用具有低自發(fā)熒光的專門(mén)細(xì)胞培養(yǎng)容器。

　　ibidi的解決方案

　　許多顯微鏡技術(shù)，如相位對(duì)比、寬場(chǎng)熒光和共聚焦顯微鏡，都可以不受限制地使用任何具有ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的ibidi實(shí)驗(yàn)器皿。

　　當(dāng)計(jì)劃一個(gè)活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)時(shí)，您的設(shè)置是否滿足所有必要的要求?

　　如果連續(xù)或在特定時(shí)間點(diǎn)需要多個(gè)圖像，那么活細(xì)胞成像可能是您的最佳選擇。為了在活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)中保持細(xì)胞的存活和健康，必須在顯微鏡上建立和維持生理?xiàng)l件——與培養(yǎng)箱內(nèi)的設(shè)置相同。

　　ibidi的解決方案

　　ibidi Stage Top Incubation Systems 孵育系統(tǒng)可用于載玻片/培養(yǎng)皿和多孔板。它允許在任何倒置顯微鏡上進(jìn)行短期和長(zhǎng)期分析期間準(zhǔn)確可靠地控制重要的活細(xì)胞成像參數(shù)（溫度、CO2和O2濃度以及相對(duì)濕度）。如果需要額外控制氧氣水平（例如，在缺氧實(shí)驗(yàn)中），ibidi Stage Top Incubation Systems, CO2/O2 孵育系統(tǒng)是理想的解決方案。